ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ КРАПИВЫ КОНОПЛЕВОЙ ТРАВЫ, ПРОИЗРАСТАЮЩЕЙ НА ТЕРРИТОРИИ АЛТАЙСКОГО КРАЯ Urtica cannabina, фенольные соединения, флавоноиды, кверцетрин
Л.М. Федосеева, В. О. Кирьянова Алтайский государственный медицинский университет, пр. Ленина, 40, Барнаул (Россия)

Методами ТСХ и ВЭЖХ в крапиве коноплевой (Urtica cannabina L.), траве, семейство Urticaceae, идентифицированы флавоноиды: кемпферол, гиперозид, кверцетрин, робинии; производные фенолкарбоновых кислот: феруловой, коричной, кумаровой; а также компоненты танина и резорцин. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетрин составило 1,17%.

Введение
Флавоноиды, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты - наиболее распространенные группы фенольных соединений, которые содержатся в лекарственных растениях. Данные вещества обладают биологической активностью за счет находящихся в молекуле гидроксильных и/или карбонильных групп, принимающих участие в биохимических процессах организма и обусловливают широкий спектр их фармакологической активности [1, 2].
В настоящее время большое внимание уделяют изучению растений рода Urtica. В Алтайском государственном медицинском университете проводится комплексное исследование трех видов крапивы (Urtica), семейство Urticaceae: двудомная (Ur. dioica L.), коноплевая (Ur. cannabina L.), жгучая (Ur. urens L.).
Цель настоящей работы - изучение фенольных соединений крапивы коноплевой травы.
Объектами исследования служили образцы Urticae cannabinae травы, собранные в период цветения в окрестностях Барнаула в 2010 г.

Экспериментальная часть
Сырье измельчали до размера не более 2 мм, подвергали экстракции в соотношении сырья и экстрагента 1 : 10, в качестве экстрагента использовали воду очищенную, спирт этиловый 70%, диэтиловый эфир, этилацетат, бутанол. Извлечение готовили с использованием водяной бани.
Схема выделения фенольных соединений из крапивы коноплевой травы на рисунке 1. Качественные реакции на фенольные соединения проводили по общепринятой методике. C целью подтверждения результатов качественных реакций для идентификации флавоноидов использовали метод тонкослойной хроматографии в системах растворителей: бутанол - уксусная кислота - вода (БУВ) (4 : 1 : 5), уксусная кислота 60% [3].
В качестве свидетелей использовали растворы стандартов рутина (Sigma, кат. №С235), кверцетрина (Sigma, кат. №H4357), кемпферола (Sigma, кат. №M3251).

Схема выделения фенольных соединений Urticae cannabinae травы
Полученные хроматограммы высушивали при комнатной температуре, рассматривали при дневном свете, в УФ свете до и после обработки спиртовым раствором алюминия хлорида 5%, отмечая изменение окраски зон флуоресценции и рассчитывали Rf.
Дальнейшую идентификацию БАС Urticae cannabinae травы проводили методом ВЭЖХ. Исследования проводили с помощью жидкостного микроколоночного хроматографа марки «Миллихром А-02», хроматографическая колонка ProntoSIL 120-5C18AQ, 2,0×75 мм. Подвижная фаза: элюент А водный раствор кислоты трифторуксусной 0,01%; элюент Б - ацетонитрил 100%. Скорость подачи элюента 100 мкл/мин, объем пробы - 2 мкл, температура колонки 35 °С; градиент 5 - 55% элюента Б за 30 мин. Параллельно проводили исследование растворов стандартных образцов в концентрации 0,05%. Детектирование веществ проводили при длинах волн 220, 254, 300, 360 нм, идентификацию осуществляли по временам удерживания и УФ спектрам, снятым в процессе хроматографирования при остановке потока элюентов, путем сравнения со спектрами стандартных образцов [4].

Обсуждение результатов
Положительные результаты проведенных качественных реакций дают возможность предположить наличие в Urticae cannabinae траве флавоноидов группы: флавонола, флавона, 5-оксифлавона и флавононола.
В результате проведения тонкослойной хроматографии оптимальной системой для идентификации флавоноидов является БУВ (4 : 1 : 5), обнаружены два пятна желтого цвета, в УФ свете имеющие голубую флюоресценцию, после обработки спиртовым раствором алюминия хлорида 5% выделены пятна со значением Rf 0,85 и 0,86, что соответствует значению Rf стандартов кверцетрина и кемпферола.

Результаты идентификации флавоноидов Urticae cannabinae травы методом ТСХ
№ п/п Значения Rf рутина Значения Rf кверцетрина Значения Rf кемпферола Значения Rf извлечения из травы
1 2 3 0,55±0,05 0,56±0,05 0,56±0,05 0,85±0,05 0,86±0,05 0,85±0,05 0,86±0,05 0,87±0,05 0,86±0,05 0,85±0,05 0,86±0,05 0,85±0,05
Методом ВЭЖХ изучены эфирная, этилацетатная, бутанольная и водная фракции извлечения Urticae cannabinea травы.
При изучении эфирной фракции обнаружены ряд пиков. Анализ их спектров поглощения, свидетельствует об отсутствии флавоноидов-гликозидов в извлечении (рис. 2, 3). Обнаружены пики ряда веществ фенольной природы, соответствующие стандартным растворам с временами удерживания: 8,4 мин, Хmax 200, 220, 280 нм - резорцин; 13 мин, 1max 200, 225, 280 нм - эфир коричной кислоты; 14,5-15 мин, Хmax 218, 220 нм - эфир галловой кислоты; 22,8 мин, 1max 220, 330 нм - кислота фенилпропановая; 26,5 мин, Хmax 300, 320 нм - метоксикумаровая кислота (табл. 2).


При исследовании этилацетатной фракции на хроматограмме обнаружены три пика (рис. 4), соответствующие флавоноидам-монозидам группы флавона Хmax 360 нм.
Вещества со временем удерживания: 15 мин - гиперозид, 17 мин - кверцетрин, 23 мин - флавоноид-моногликозид, информация о строении которого в доступной литературе не обнаружена.
Из бутанольной фракции на хроматограмме обнаружены четыре пика флавоноидов-гликозидов группы флавона со временами удерживания 12 мин, Хmax 200, 215, 270, 330 нм - шафтозид; 14,7 мин, ^ax 220, 270, 335 нм - робинии; 17 мин, Хmax 200, 260, 350 нм - кверцетрин; 18,4 мин, 1max 200, 220, 270, 330 нм - флавоноид группы апигенина. Можно полагать, что бутанолом извлекаются не только биозиды и триозиды, но и флавоноиды-монозиды. Обнаруженные флавоноиды и их спектральные характеристики представлены в таблице 3. Кроме того идентифицированы: резорцин, время удерживания 8,4 мин, Хmax 220 нм; вещества с временами удерживания 9 и 11 мин, 1max 220 и 270 нм, имеющие одинаковый спектр с фенольным поглощением - дигидроксикислоты; время удерживания 29,5 мин, 1max 300, 320 - метоксикумаровая кислота (рис. 6).
В результате ВЭЖХ водной фракции Urticae cannabinae травы обнаружены фенолокислоты: время удерживания 9 мин, 1max 220, 270 нм - дигидроксибензойная кислота; вещество со временем удерживания 12 мин, Хmax 360 нм, соответствующее спектру С-гликозида апигенина.

Количественное содержание суммы флавоноидов Urticae cannabinae травы определяли методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием алюминия хлоридом 5%, экстрагент - этиловый спирт 70%. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетрин составило 1,17 ±0, 02%.

Выводы
В результате исследования методами тонкослойной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии Urticae cannabinae травы идентифицировали флавоноиды: кемпферол, гиперозид, кверцетрин, робинии; производные фенолкарбоновых кислот: феруловой, коричной, кумаровой; а также компоненты танина и резорцин. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетрин - 1,17%.

Список литературы
1. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири. Иркутск, 1985. С. 79-80.
2. Akbay P. In vitro immunomodulatory activity of flavonoid glycosides from Urtica dioica L. // Phytother Res. 2003. Vol. 17. Pp. 34-37.
3. Гринкевич Н.И. Химический анализ лекарственных растений. М., 1983. 85 с.
4. Geissman T.A. The flavonoid compounds. Oxford, 1962. 666 p.

Fedoseeva L.M. , Kiryakova V.O. STUDY OF SOME PHENOLIC COMPOUNDS URTICA CANNABINA HERBS GROWING IN THE ALTAI TERRITORY
Methods TLC and HPLC methods in the Urticae cannabinae herbs (Urticaceae family) identified flavonoids: kaempferol, hyperoside, kvertsetrin, robinin; derivatives phenol carbonic acids: ferulic, cinnamic, coumaric, as well as components of resorcinol and tannin. The content of flavonoids amounts in terms of kvertsetrin was 1.17%.
Keywords: Urtica cannabina, phenolic compounds, flavonoids, kvertsetrin.
References
1. Teliat'ev V.V. Poleznye rasteniia Tsentral'noi Sibiri. [Useful plants of Central Siberia]. Irkutsk, 1985, pp. 79-80. (in Russ.).
2. Akbay P. Phytother Res, 2003, vol. 17, pp. 34-37.
3. Grinkevich N.I. Khimicheskii analiz lekarstvennykh rastenii. [Chemical analysis of medicinal plants]. Moscow, 1983, 85 p. (in Russ.).
4. Geissman T.A. The flavonoid compounds. Oxford, 1962. 666 p.