Изучены фенольные соединения листьев форзиции промежуточной методом ВЭЖХ в спиртовом извлечении установлено наличие более 20 фенольных соединений. По стандартным образцам идентифицированы флавоноиды: нарингинин, геспиридин, рутин и кверцетин; фенолкарбоновые кислоты: кофейная, и-кумаровая, феруловая, синаповая и коричная.
Введение
Форзиция промежуточная и ее родственные виды используются в китайской народной медицине и входят в реестр лекарственных растений государственной фармакопеи КНР [1, 2]. Лекарственным сырьем являются высушенные плоды (Fructus Forsythiae), содержащие лигнан форзицин. Извлечение из плодов применяют для устранения токсического жара, торможения роста опухолей, новообразований, затвердений. Порошок и отвар корней форзиции используют как жаропонижающее и противоинфекционное средство, антисептик для дезинфекции мочевых путей, при гипертонической болезни и для предотвращения кровоизлияния в мозг.
В научной медицине применяют в виде капсул лекарственный препарат, который содержит в своем составе плоды форзиции - 23,8 мг. Курсовое применение препарата способствует уменьшению интенсивности и исчезновению болевого синдрома, что сопровождается регрессом структурных изменений ткани молочных желез [3]. Кашицу из свежих листьев форзиции применяют как наружное средство при гнойничковых воспалениях кожи, чесотке и экссудативном диатезе [1]. Химический состав листьев форзиции промежуточной изучен недостаточно. В связи с вышеизложенным цель нашей работы - изучение фенольных соединений листьев форзиции промежуточной.
Экспериментальная часть
Образцы сырья для исследования были заготовлены в 2009 г. в городских парках Пятигорска, Железноводска и Кисловодска.
Для детального изучения фенольных соединений исследуемого объекта использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Исследование проведено на факультете химии и высоких технологий Кубанского государственного университета.
составе исследуемого растительного объекта 5,0 г сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 40 мл спирта этилового 70%. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 40 мин, после чего охлаждали до комнатной температуры. Спиртовое извлечение фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. В колбу с сырьем прибавляли 40 мл спирта этилового 70% и продолжали нагревание в течение 30 мин. После охлаждения вторичное спиртовое извлечение фильтровали в ту же мерную колбу, а сырье обрабатывали еще 10 мл спирта этилового 70%, фильтруя в ту же колбу [4].
Объем жидкости в колбе доводили до метки спиртом этиловым 70% и тщательно перемешивали. Спиртовое извлечение перед хроматографированием разбавляли (1:10) смесью ацетонитрилфосфатный буфер (1 : 1) [5].
Хроматографическое определение. Исследование проводили методом обращеннофазной жидкостной хроматографии, обеспечивающим высокое разрешение и чувствительность. Условия хроматографии подобраны с учетом физико-химических свойств биологически активных соединений в растительном сырье, варьируя состав элюента и длину волны детектирования. Анализ проводили на хроматографе Shimadzu LC20 Prominence с последующей компьютерной обработкой результатов исследования в среде программы LC Solution. Диодноматричное детектирование в УФ-области спектра позволило оценить спектральные характеристики разделенных компонентов по хроматограмме и получить дополнительную информацию для их идентификации.
Оптимальные результаты элюирования были получены в бинарной градиентной системе: ацетонитрил - водный раствор калия дигидрофосфата (0,04 М), подкисленный кислотой фосфорной до рН 2,8.
При проведении анализа использовали градиентный ступенчатый режим поступления элюента:
1 ступень: 0-3 мин экспозиции при концентрации ацетонитрила в фосфатном буфере 3%;
2 ступень: 4 мин экспозиции - концентрация ацетонитрила возросла от 3 до 5%, с 5 по 9 мин концентрация элюента составила 5%;
3 ступень: с 9 по 16 мин экспозиции концентрация ацетонитрила возросла от 5 до 20%, а следующие три минуты составляла 20%;
4 ступень: с 19 по 27 мин концентрация ацетонитрила возросла от 20 до 40% и следующие три минуты составляла 40%.
Хроматографирование проводили на колонке Zorbax SB C18, размерами 150×2,1 мм, заполненной частицами сорбента 5 мкм (Agilent).
Скорость потока элюента - 0,25 мл/мин, температура термостата и ячейки детектора - 35 °С. Объем пробы - 5 мкл.
Детектирование веществ проводили при трех длинах волн (280, 322, 370 нм). Идентифицировали вещества по времени удерживания и спектрам поглощения растворов стандартных образцов, предварительно хроматографируя каждый из них в отдельности.
Обсуждение результатов
Хроматограмма спиртового извлечения из листьев форзиции промежуточной представлена в электронном приложении к статье. Из нее следует, что в листьях форзиции промежуточной обнаружено более двадцати веществ фенольного характера. Методом ВЭЖХ показано наличие нарингинина (21,94 мин), геспиридина (23,24 мин), рутина (19,95 мин) и кверцетина (26,55 мин).
Кроме флавоноидов в листьях форзиции обнаружены также фенолкарбоновые кислоты: кофейная (16,81 мин), и-кумаровая (19,13 мин), феруловая (20,21 мин), синаповая (20,62 мин) и коричная (28,32 мин).
Выводы
Проведенные исследования позволили выявить качественный состав фенольных соединений листьев форзиции промежуточной. Подобраны оптимальные условия проведения ВЭЖХ. С помощью метода ВЭЖХ в исследуемом объекте идентифицировано пять фенолокислот (кофейная, и-кумаровая, феруловая, синаповая, коричная) и четыре флавоноида (нарингинин, геспиридин, рутин и кверцетин). Полученные результаты показали, что листья форзиции промежуточной представляют определенный интерес в качестве лекарственного растительного сырья.
Список литературы
1. Шретер А.И. Природное сырье китайской медицины: в 2-х т. М., 2004. Т. 1. 840 с.
2. Маммолептин.
3. Принцесса весеннего сада - форзиция (FORSYTHIA).
4. Краснов Е.А. и др. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. Томск, 1987. 193 с.
5. Абдулбекова В.Н., Тулганов А.А. Разработка метода количественного анализа цветков календулы лекарственной // Химико-фармацевтический журнал. 2001. Т. 35, №10. С. 25-26.
Popova O.I., Leonova V.N.*, Savenko I.A. RESEARCH OF PHENOLIC CONNECTIONS OF FORSYTHIA INTERMEDIATE LEAVES (FORSYTHIA INTERMEDIA ZABEL.)
Pyatigorsk State Pharmaceutical Academy, pr. Kalinina, 11, Piatigorsk, 357532 (Russia)
The purpose of work was studying phenolic connections of forsythia intermediate leaves. Method of HPLC in spirit extraction presence more than 20 phenolic connections is determining. On standard samples are identified flavonoides: naringinin, gespiridin, routin and quercitin; phenolcarbonic acids: coffee, p-coomeric, ferulic, cinapic and cinnamon.
References
1. Shreter A.I. Prirodnoe syr'e kitaiskoi meditsiny. [Natural raw materials of Chinese medicine]. Moscow, 2004, vol. 1, 840 p. (in Russ.)
2. Mammoleptin. Available:2012. (in Russ.)
3. Printsessa vesennego sada – forzitsiia (FORSYTHIA). [Princess spring garden – Forsythia].
4. Krasnov E.A. et al. Vydelenie i analiz prirodnykh biologicheski aktivnykh veshchestv. [Isolation and analysis of natural biologically active substances]. Tomsk, 1987, 193 p. (in Russ.)
5. Abdulbekova V.N., Tulganov A.A. Khimiko-farmatsevticheskii zhurnal, 2001, vol. 35, no. 10, pp. 25–26. (in Russ.)