ФЕНОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОДА ОЧАНКА (EUPHRASIA L.) флавоноиды, фенолокислоты, кумарины, ВЭЖХ, Euphrasia

ФЕНОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОДА ОЧАНКА (EUPHRASIA L.) ФЛОРЫ ПЕРМСКОГО КРАЯ
Т.В. Бомбела, В.М. Петриченко, О.А. Кроткова Пермская государственная фармацевтическая академия,ул. Большевистстская, 101, Пермь (Россия)

Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) изучен состав фенольных соединений E. brevipila Burnat et Gremli, E. parviflora Schag., E. x reuteri Wettst, E. officinalis L., E. stricta D. Wolff. ex J.F.Lehm., E. x murbeckii Wettst., E. tatarica Fisch., произрастающих в Пермском крае. В составе фенольных соединений идентифици-рованы: феруловая, кофейная, хлорогеновая и галловая кислоты, лютеолин, кверцетин, дигидрокверцетин, кумарин, дикумарин, скополитин, умбеллиферон. Доминирующими компонентами фенольного комплекса всех видов являются фенолкарбоновые кислоты.

Введение
Род Очанка - Euphrasia L. (Scrophulariaceae) объединяет однолетние паразитирующие растения, ха-рактеризующиеся высоким уровнем полиморфизма с трудно отличимыми признаками внешнего и внут-реннего строения [1, 2]. На территории Пермского края род представлен 11 видами [3]. Надземная часть этих растений широко применяется в научной и народной медицине, а также является сырьем для произ-водства парафармацевтических препаратов и Б АД [2]. Имеются сведения о гипотензивной [4, 5], гепато-протекторной [6], антимикробной [7], антиоксидантной [8], противолейкемической [9] активности извле-чений из травы очанки. Широкий спектр фармакологической активности травы различных видов Euphrasia обусловлен наличием биологически активных веществ (БАВ), относящихся к различным классам природ-ных соединений.

Фенольные соединения (флавоноиды, фенолокислоты, кумарины) являются доминирующими группа-ми БАВ видов рода Очанка. Сведения о фенольных соединениях этих растений относятся преимущественно к видам, встречающимся в Западной Европе, в то время как произрастающие в России изучены недостаточно. Так, флавоноиды E. Rostkoviana Hayne. представлены агликонами и гликозидами флавона и флавонола [10, 11, 12], группа органических кислот - кофейной [13], бензойной [14] и коричной [15] кислотами. Данные по составу фенольных соединений растений рода Очанка важны как в целях хемосистематики, так и для взаимо-заменяемости видов при производстве фармацевтических препаратов и БАД.

Цель настоящей работы - сравнительное изучение состава фенольных соединений семи видов рода Euphrasia флоры Пермского края методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Экспериментальная часть
Объектами исследований служила надземная часть с корнями E. brevipila Burnat et Gremli, E. parviflora Schag., E. x reuteri Wettst., E. officinalis L., E. stricta D. Wolff. ex J.F.Lehm., E. x murbeckii Wettst., E. tatarica Fisch., собранная на территории Пермского края в 2006-2007 гг (табл. 1). Образцы сырья собирали в фазу цветения - начала плодоношения. Растительное сырье сушили на воздухе в тени, измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. 10,0 г измельченного расти-тельного материала помещали в колбу объемом 250 мл, прибавляли 50 мл 70% этилового спирта, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч с момента закипа-ния спирто-водной смеси в колбе. Извлечение, охлажденное до комнатной температуры, фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу объемом 100 мл и доводили 70% этиловым спиртом до метки (ис-следуемый раствор). Параллельно готовили серию 0,05% растворов стандартных образцов в 70% этиловом спирте (РСО).
Анализ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON» (Фран-ция, модель 305) с ручным инжектором RHEODYNE - 7125 (USA) и компьютерным программным обеспечением «Мультихром» для «Windows». Использовали металлическую колонку размером 4,6×250 мм Kro-masil C18, размер частиц 5 мкм.
В качестве подвижной фазы использовали систему метанол - вода - фосфорная кислота концентри-рованная в соотношении 400 : 600 : 5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа 60 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «CILSTON» UV/VIS, модель 151, при длине волны 254 нм.
По 20 мкл исследуемого раствора и растворов стандартов вводили в хроматограф. Идентификацию веществ проводили путем сопоставления времен удерживания разделенных компонентов на хроматограм-ме с временами удерживания РСО. Для сравнительной оценки относительного состава отдельных групп фенольных соединений у различных видов использовали метод внутренней нормализации. По площадям пиков находили количественное соотношение идентифицированных веществ в пробах. Повторность опре-деления трехкратная.

Образцы растений рода Euphrasia L.
№ Виды Место сбора Дата сбора
1 E. brevipila Пермский край, Бардымский р-н, с. Бичурино, заливной луг 13.08.06
2 E. parviflora Пермский край, Куединский р-н, с. Пантелеевка, суходольный луг 20.07.06
3 E. x reuteri Пермский край, г. Пермь, м/р Бахаревка, суходольный луг 19.07.07
4 E. officinalis Пермский край, Кудымкарский р-н, с. Самково, лесная поляна 15.08.06
5 E. stricta Пермский край, г. Пермь, п. Новобродовский, суходольный луг 22.07.06
6 E. x murbeckii Пермский край, г. Лысьва, д. Лязгино, суходольный луг 04.08.06
7 E. tatarica Пермский край, г. Краснокамск, ст. Оверята, опушка леса 27.07.06

Обсуждение результатов
В результате проведенного исследования в спиртовых извлечениях из травы различных видов Eu-phrasia обнаружено от 15 до 28 компонентов, из которых идентифицировано 11 веществ из группы фено-локислот, флавоноидов и кумаринов (табл. 2). Большинство соединений установленного строения относят-ся к группе фенолокислот. Неидентифицированные соединения, вероятно, принадлежат к группе гликози-дов фенольных соединений, интенсивно поглощающих в области 240-260 нм [16, 17], что совпадает с об-ластью хроматографического детектирования.
Качественный состав и относительное количественное соотношение идентифицированных феноль-ных соединений у семи видов рода Euphrasia представлены в таблице 3. Параметры количественного соот-ношения идентифицированных веществ, полученные в условиях аналитической идентичности, позволяют оценить состав БАВ у видов рода Euphrasia. При этом они не являются показателями количественного со-держания идентифицированных веществ, а характеризуют соотношение компонентов в пробе. В данной хромато графической системе отсутствует четкая зависимость времен удерживания от полярности соединений, что довольно часто встречается в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ [18].

Компонентный состав БАВ растений рода Euphrasia L.
Количество компонентов, обнаруженных в пробе В том числе идентифицировано:
фенолокислоты флавоноиды кумарины
E. brevipila 21 4 3 2
E. parviflora 15 3 1 3
E. x reuteri 20 2 1 3
E. officinalis 18 3 1 2
E. stricta 28 4 1 2
E. x murbeckii 25 4 3 3
E. tatarica 23 4 2 1

Доминирующими компонентами у всех исследованных видов являются фенолкарбоновые кислоты (табл. 3). Их суммарное содержание в пробах находится в пределах 39-55%. Максимальное суммарное со-держание фенолокислот отмечается в E. officinalis (55%), а минимальное - в гибридных видах - E. x reuteri и E. x murbeckii, 41 и 39% соответственно. Постоянными компонентами фенольного комплекса являются галловая и хлорогеновая кислоты. Наибольшее количество галловой кислоты обнаружено у E. stricta (6,8%), а хлорогеновой кислоты - у E. parviflora (47%). Количественное соотношение феруловой кислоты в пробах колеблется в широких пределах. Максимальное количество этой кислоты обнаружено в E. tatarica (20%), а минимальное -вE. parviflora (1,8%). В E. x reuteri феруловая кислота не обнаружена.
Флавоноиды у исследованных видов Euphrasia представлены производными флавона, флавонола и флаванонола. Суммарное содержание агликонов флавоноидов в пробах находиться в пределах 0,05-5,0%. Максимальное количество лютеолина отмечено в E. brevipila (2,5%), кверцетина и дигидрокверцетина в E. x murbeckii, 5,4 и 1,2% соответственно.
Кумариновые соединения у видов Euphrasia представлены окси-, метоксипроизводными кумарина и его димерами. Наибольшее содержание суммы кумариновых производных в пробах характерно для E. parviflora (9,4%), E. x reuteri (9,2%) и E. brevipila (5,5%), что, вероятно, обусловливает антикоагулянтное дей-ствие спиртовых извлечений из травы этих видов [19]. Природные кумарины замедляют процесс свертыва-ния крови [20]. Кумарин доминирует в E. stricta (1,5%), дикумарин в E. x reuteri (8,6%), скополетин в E. brevipila (5,5%), а умбеллиферон в E. x murbeckii (1,5%).

Примечание. * - соотношение идентифицированных веществ от общего количества разделенных компонентов в пробе, %; ** - среднее значение. Колебание полуширины доверительного интервала (А X) находится в пределах 5-10%
от среднего значения; прочерк означает, что данное вещество не обнаружено.

Выводы
В семи видах рода Euphrasia L.: E. brevipila Burnat et Gremli, E. parviflora Schag., E. x reuteri Wettst, E. officinalis L., E. stricta D. Wolff. ex J.F.Lehm., E. x murbeckii Wettst., E. tatarica Fisch., флоры Пермского края идентифицировано 11 веществ фенольной природы, относящихся к различным классам природных соединений: фенолокислот - феруловая, кофейная, хлорогеновая и галловая кислоты; флавоноидов - лю-теолин, кверцетин, дигидрокверцитин; кумариновых производных - кумарин, дикумарин, скополетин, ку-марин, умбеллиферон. Доминирующими компонентами фенольного комплекса всех видов являются фе-нолкарбоновые кислоты, их суммарное содержание в пробах находится в пределах 39-55%.


Список литературы
1. Гусарова Г.Л. Конспект рода Euphrasia (Scrophulariaceae) России и сопредельных государств // Бот. журн.2005. Т. 90, вып. 7. С. 1087-1115.
2. Петриченко В.М., Сухинина Т.В. Очанки Западного Урала (фармакогностические и биологические аспекты). Пермь, 2006. 145 с.
3. Овеснов С.А. Конспект флоры Пермской области. Пермь, 1997. 252 с.
4. Юсупова Н.Я. Влияние очанки на кровообращение и экспериментальную гипертонию : дис. … канд. мед. на-ук. Ташкент, 1956. 210 с.
5. Юсупова Н.Я. Влияние очанки, произрастающей в Киргизии, на кровообращение и экспериментальную ги-пертонию // Труды Киргизского медицинского института. 1957. Т. 9. С. 83-87.
6. Гришина Е.А., Гришин А.В., Кармацкая Н.В. Перспективы использования очанки коротковолосистой при остром гепатите // Лекарственные растения Алтайского края. Томск, 1986. С. 46–49.
7. Петриченко В.М., Сухинина Т.В., Одегова Т.Ф., Бабиян Л.К., Шрамм Н.И. Антимикробная активность извле-чений из трех видов Euphrasia L. // Растительные ресурсы. 2002. Т. 38, вып. 3. С. 82-86.
8. Петриченко В.М., Сухинина Т.В., Бабиян Л.К., Шрамм Н.И. Химический состав и антиоксидантная активность биологически активных веществ очанки коротковолосистой // Химико-фармацевтический журнал.2006. Т. 40, вып. 6. С. 66-67.
9. Goun E.A., Petrichenko V.M., Solodnikov S.U., Suchinina T.V., Kline M.A., Cunningham G., Nguyen C, Miles H. Anticancer and antithrombin activity of Russian plants // Journal of Ethnopharmacology. 2001. N81. S. 337-342.
10. Matlawska J., Sikorska M., Kowalewski Z. Zwiazki flawonoidave w herba Euphrasia // Herba pol. 1985. N3-4. Pp. 119-123.
11. Matlawska J., Sikorska M., Kowalewski Z. Zwiazki flawonoidave w herba Euphrasia // Herba pol. 1988. N3. Pp. 97-102.
12. Pethes E., Marczal G., Kery A. Ingredients of several species of the Scrophulariaceae family // Gyogyszet. 1973. V. 17, N4. S. 129-131.
13. Broda B., Jaronewski W., Swiatek L. Owystepowaniu kwasu kawowego w niektórich roslinach leczych // Acta pol. Pharm. 1960. V. 17, N4. S. 301-306.
14. Krolikowska M. Skladniki ziela swietlika takovego (Euphrasia rostkoviana Hayne.) // Rocz. Chem. 1967. V. 41, N2. Pp. 327–-336.
15. Hegnauer R. Chemotaxonomie der Pflanzen. Band 3: Dioctyledoneae, I. Teil: Von Acanthaceae bis Cyrillaceae. Ver-lag Birkhäuser, Basel und Stuttgart, 1964. 744 s.
16. Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования) Алма-Ата, 1978. 220 с.
17. Бандюкова В.А. Фенолокислоты растений их эфиры и гликозиды // Химия природ. соединений. 1983. №2. С. 271-275.
18. Сапрыкин Л.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Харьков, 2007. 228 с.
19. Сухинина Т.В., Петриченко В.М., Сыропятов Б.Я., Шестакова Т.С. Антикоагуляншая активность паразитирую-щих растений семейства Норичниковые // Человек и лекарство: Мат. XIV Рос. нац. конгресса. М., 2007. С. 882.
20. Кузнецова Г. А. Природные кумарины и фурокумарины. Л., 1967. 247 с.