Объектом исследования был выбран можжевельник сибирский, произрастающий на территории Красноярского края Ермаковского района.
Цель данной работы - изучение качественного и количественного содержания биологически активных веществ и минерального состава можжевельника сибирского. В связи с уникальностью Juniperus sibirica Burgsd. и медленным ростом была предложена альтернативная технология получения биологически активных веществ из каллусной ткани.
Введение
Juniperus sibirica Burgsd. - вечнозеленый низкорослый, стелющийся хвойный кустарник семейства кипарисовых. В диком виде растет в горных районах Средней Азии, Крыму, Алтае-Саянской горной области, на Кавказе, Дальнем Востоке и в Сибири [1].
Можжевельник сибирский - вид, который нуждается в защите и изучении [1-3], имеет высокие декоративные качества, отличается медленным ростом.
Первое упоминание о целебных свойствах можжевельника встречается уже в античных источниках [4]. Можжевельник широко применяется в народной медицине разных стран благодаря значительному содержанию в хвое и ягодах эфирных масел. По фармакологическому действию они оказывают мочегонное, отхаркивающее, противоспалительное и бактерицидное действие, могут использоваться при заживлении ран и лечении гнойных поражений кожи [2, 5]. В последнее время благодаря своим антисептическим свойствам, обусловленным высоким содержанием эфирных масел в хвое и молодых побегах, можжевельник стал широко использоваться в озеленении парков и зон отдыха [6].
Можжевеловое масло применяется главным образом в производстве парфюмерных и косметических продуктов. Эфирные масла служат источником получения душистых веществ, для улучшения парфюмерных свойств и повышения устойчивости к окислению [7]. В последнее время эфирное масло стало широко использоваться в ароматерапии. Можжевеловое масло находит применение в медицине как эффективное антисептическое средство, в микроскопической технике - как иммерсионное масло, в пищевой промышленности для приготовления напитков [3, 7].
Согласно литературным данным, содержание эфирного масла в хвое можжевельника зависит от вида и места произрастания [7], а также времени года [8]. По данным Д. К. Уваровской [8], снижение выхода эфирных масел отмечено в весенне-летний период, что нагляДно подтверждает их участие в процессах развития растений. В осенне-зимний период у всех видов растений отмечено накопление масла, которое, очевидно, играет роль защитника растений не только от вредителей и болезней, но и от морозов[8]. Содержание эфирного масла в хвое Juniperus sibirica, произрастающего на территории Средней Азии, составляет 0,8-0,9% [9]. В одногодичных побегах можжевельника сибирского, произрастающего в дальне-восточном регионе, выход эфирного масла составляет 2,11% [8]. Следует отметить, что можжевельник сибирский является наиболее продуктивным по выходу масла в сравнении с семью видами: даурским, Саржента, твердым, прибрежным, обыкновенным, зеравшанским и туркестанским [8].
Известно, что эфирное масло Juniperus sibirica, произрастающего на севере Средней Азии, состоит на 80% из а-пинена, обнаружены следы камфена и незначительное содержание секвитерпенов [10]. В эфирном масле можжевельника сибирского, произрастающего на Дальнем Востоке, преобладают а-, 3-пинены. В заметных количествах присутствуют мирцен, а-, 3-фелландрены, цинеол, а-туйон, сибирен, терпинеол, кадинены, около 2% А3-карена. Сумма монотерпеноидов составляет 78,9% [8].
В плодах можжевельника содержится до 42% Сахаров, до 2,6% органических кислот (яблочной, уксусной, муравьиной), флавоновые гликозиды, смолы, воск, инозит, пигменты и другие вещества. В коре ветвей до 8% дубильных веществ, а в хвое до 266 мг% аскорбиновой кислоты [11].
Анализ литературных источников показал недостаточность сведений о химическом составе можжевельника, произрастающего на территории Красноярского края. В связи с этим целью данного исследования было определение качественного и количественного содержания биологически активных и минеральных веществ можжевельника сибирского.
Экспериментальная часть
Содержание биологически активных веществ определялось по стандартным методикам, используемым при анализе растительного сырья [12-18].
Исследование минерального состава хвои проводилось методом атомно-адсорбционной плазменной спектроскопии [19].
Идентификация отдельных компонентов, входящих в состав эфирного масла, проводилась с использованием методов газожидкостной хроматографии и масс-спектрометрии.
Исследование химического состава каллусной ткани и послеэкстракционного остатка Juniperus sibirica проводили по методикам, принятым в химии древесины и биохимии растений [16, 20, 21].
Методика получения каллусной ткани описана в предыдущих работах [22].
Обсуждение результатов
Одной из задач исследования являлось определение содержания эфирного масла в хвое Juniperus sibirica и изучение его индивидуального состава.
Эфирное масло можжевельника представляет собой подвижную жидкость светло-желтого цвета. Содержание эфирного масла в хвое Juniperus sibirica составило 1,8-2%.
Идентификация отдельных компонентов, входящих в состав эфирного масла, проводилась с использованием методов газожидкостной хроматографии и масс-спектрометрии.
Полученные результаты показали, что эфирное масло Juniperus sibirica представлено большим спектром компонентов, из которых 13 компонентов имеют концентрацию более 1% (табл. 1).
Преобладающие компоненты эфирного масла изучаемых образцов - низкокипящие фракции терпеновых углеводородов, состоящие из а- и в-пиненов. Последние считаются самыми распространенными в природе монотерпеновыми углеводородами. Промышленное производство а-пинена относится к числу крупномасштабных. Он является основным компонентом скипидара. Применяется для получения терпинеола и превращается в производные камфана. Последние используются как сырье для производства синтетической камфоры. Состав эфирного масла на 77,3% представлен монотерпеноидами, в том числе 74,63% приходится на бициклические монотерпеноиды и 2,67% приходится на моноциклические циклогексановые монотерпеноиды, 21,08% представлен секвитерпеноидами.
С медицинской точки зрения практический интерес представляют сведения о содержании камфоры.
Камфора - это терпеновый кетон, который был обнаружен в эфирном масле Juniperus sibirica в количестве более 1%. Камфора входит в состав некоторых сердечных и обезболивающих препаратов. Применяется и самостоятельно при острой и хронической сердечной недостаточности, гипотонии, как стимулятор дыхания. Камфора также находит широкое применение в промышленности как пластификатор при производстве целлулоида и фотографических пленок [23, 24].
Помимо исследования химического состава эфирного масла, важным моментом работы было исследование содержания биологически активных веществ (БАВ) можжевельника сибирского. Полученные результаты приведены в таблице 2.
Компонентный состав эфирного масла Juniperus sibirica
Компоненты Содержание, % Компоненты Содержание, %
а-пинен 62,02 Азулен 0,46
Р-пинен 4,17 Копаен 2,25
Р-мирцен 2,94 Элемен 3,63
Д3-карен 0,17 Кариофиллен 2,27
Д2-карен 0,89 А-кубебен 9,42
А-фелландрен 0,10 А-аморфен 2,81
Камфен 2,04 В-селинен 0,17
Лимонен 2,57 А-бисаболен 0,07
Камфора 1,41 Бутановая кислота 0,43
Борнил ацетат 0,99 Не идентифицировано 1,19
Содержание биологически активных веществ в хвое Juniperus sibirica
Наименование Содержание компонента
компонента % а.с.м.* мг%
Алкалоиды 0,29±0,03 –
Флавоноиды 0,09±0,0003 –
Сапонины 0,31±0,01 –
Подофиллотоксин 0,0018±0,00005 –
Протеин 6,77±0,01 –
Витамин С – 21,78±0,16
Витамин Р – 4,68±0,14
Витамин В1 – 1,43±0,01
Хлорофилл А – 95,42±0,29
Хлорофилл В – 126,04±0,25
Каротин – 85,42±0,61
Одним из наиболее практически значимых биологически активных веществ, присутствующих в хвое Juniperus sibirica, является подофиллотоксин. Полусинтетические производные подофиллотоксина этопозид и тенипозид обладают выраженной антивирусной и противоопухолевой активностью [14, 25-27]. Химический синтез по-дофиллотоксина трудно выполним и экономически не выгоден. Поэтому имеет большое практическое значение поиск дикорастущих растений, содержащих подофиллотоксин. Можжевельник сибирский является одним из таких видов.
Содержание подофиллотоксина в хвое Juniperus sibirica составило 0,0018% от а.с.м.- абсолютно сухая масса
При использовании Juniperus sibirica в виде галеновых препаратов лечебное действие содержащихся в них биологически активных веществ может успешно сочетаться с действием минеральных веществ. Исследование минерального состава хвои проводилось атомно-адсорбционной плазменной спектроскопией [19] (табл. 3).
Полученные результаты показали наличие в хвое значительного количества как макро-, так и микроэлементов - марганца, титана, бария, стронция, бора и др.
Таким образом, можжевельник сибирский богат микро- и макроэлементами, эфирными маслами и ценными биологически активными веществами и может представлять интерес для медицины, парфюмерии и пищевой промышленности как источник получения таковых.
С каждым годом возрастает потребность человечества в лекарственных препаратах. Несмотря на успехи химии, давшей медицине много новых эффективных синтетических препаратов, использование лекарственных растений приобретает все большие масштабы. Широкое применение растений как источника для получения ценных биологически активных соединений приводит к стремительному сокращению их природных популяций. На современном этапе развития биотехнология может предложить новые решения этой проблемы, благодаря появлению культуры тканей и клеток высших растений [28].
Развитию культуры клеток растений в качестве альтернативного источника продуктов вторичного метаболизма способствовали определенные преимущества этого способа, включая независимость от сезонных условий, болезней и их переносчиков, и возможность получать требуемый продукт круглогодично в необходимых количествах, со стандартными качественными характеристиками [29].
В связи с этим альтернативным источником получения ценных веществ может являться каллусная ткань можжевельника сибирского, полученная на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 2,4-Д (0,2 мг/л), казеином (400 мг/л).
По химическому составу растительные ткани Juniperus sibirica представляют сложный комплекс, состоящий в основном из органических веществ различного состава и структуры (табл. 4). В таблице 4 представлен сравнительный химический состав хвои и каллусной ткани можжевельника сибирского.
Из результатов, приведенных в таблице 4, следует, что хвоя Juniperus sibirica содержит значительное количество полисахаридов (38,17%), экстрактивных веществ (37,46%). Состав экстрактивных веществ представлен сложной смесью соединений различных классов, многие из которых являются ценными для медицинской и пищевой промышленности.
Минеральный состав хвои Juniperus sibirica
Минеральные элементы Содержание, мг/100 г а.с.м. Минеральные элементы Содержание, мг/100 г
Pb 3,00 P менее 1000
Cu 15,00 Ag 0,03
Zn 10,00 Y менее 1,00
V 1,00 K более 5,00
Ni 10,00 Na =5,00
Ti 80,00 Ca >5,00
Mn 200,00 Al 0,10
Ba 30,00 Fe 0,20
Sr 30,00 Si =5,00
Zr 5,00 Mg >5,00
B 30,00
Сравнительный химический состав хвои и каллусной ткани Juniperus sibirica
Содержание, % от а.с.м.
Хвоя Каллусная ткань
Экстрактивные вещества (40% этанолом) 37,46±0,07 36,52±0,35
Легкогидролизуемые полисахариды 13,90±0,08 12,46±0,10
Трудногидролизуемые полисахариды 24,27±0,01 23,82±0,14
Лигноподобные вещества 19,13±0,08 22,41±0,34
Зольные вещества 4,77±0,06 4,50±0,12
Подофиллотоксин 0,0018±0,00005 0,0038±0,00005
Протеин 6,77±0,01 7,50±0,32
По содержанию основных компонентов каллусная ткань незначительно отличается от таковых в хвое и может быть использована в качестве альтернативного источника для получения ряда ценных соединений, в частности, подофиллотоксина, обладающего противоопухолевой активностью.
После экстракции хвои и каллуса Juniperus sibirica водноспиртовым раствором остается значительное количество послеэкстракционного остатка. Для поиска квалифицированного применения послеэкстракционного остатка было проведено исследование его химического состава. Из результатов эксперимента, приведенных в таблице 5, следует, что послеэкстракционный остаток хвои и каллуса Juniperus sibirica содержит большое количество полисахаридов (56,15 и 54,75% соответственно), минеральных элементов и может быть рекомендован в качестве кормовых добавок в рацион сельскохозяйственных животных. Однако послеэкстракционный остаток хвои и каллуса J. sibirica содержит незначительное количество протеина (1,08 и 1,28%) и имеет низкую перевариваемость (24,12 и 25,43%). Для повышения питательной ценности и перевариваемости послеэкстракционного остатка J.sibirica проведено культивирование дереворазрушающего гриба Pleurotos ostreatus Fr (Kumm).
Химический состав послеэкстракционного остатка хвои и каллуса J.sibirica после ферментации грибом Pleurotos ostreatus Fr. приведен в таблице 6.
Из полученных результатов следует, что произошло изменение содержания компонентов, но степень изменения их неодинакова. Содержание протеина увеличилось в хвое в 4,7 раза, в каллусе - в 5,6 раза. Перевариваемость послеэкстракционного остатка хвои и каллуса J.sibirica после ферментации повысилась на 6,67 и 7,18% соответственно.
Ферментированный послеэкстракционный остаток хвои и каллуса J.sibirica может быть рекомендован в качестве кормовой добавки в рацион сельскохозяйственных животных. Высушенный, измельченный препарат имел коричневый цвет, выдерживал длительное хранение, не подвергался заплесневению, легко транспортировался в бумажных мешках.
Химический состав послеэкстракционного остатка хвои и каллуса Juniperus sibirica
Содержание, % а.с.м.
Хвоя Каллус
Экстрактивные вещества (40% этанолом) 9,32±0,07 8,15±0,03
Легкогидролизуемые полисахариды 17,81±0,05 14,03±0,09
Трудногидролизуемые полисахариды 38,34±0,03 40,72±0,12
Лигнин 27,94±0,08 31,18±0,14
Зольные вещества 3,61±0,01 4,01
Протеин 1,08±0,03 1,28±0,05
Химический состав послеэкстракционного остатка хвои и каллуса J.sibirica после ферментации
Наименование компонента
Экстрактивные вещества
Легкогидролизуемые полисахариды
Трудногидролизуемые полисахариды
Лигнин
Зольные вещества
Протеин
Содержание, % а.с.м.
Хвоя Каллус
19,32±0,05 19,07±0,03
15,13±0,01 11,37±0,07
33,27±0,11 37,93±0,01
21,56±0,17 24,86±0,21
4,41±0,03 4,93±0,01
5,04±0,07 7,20±0,05
Выводы
Таким образом, в результате проделанной работы было определено содержание наиболее ценных биологически активных веществ в хвое, каллусной ткани и послеэкстракционном остатке Juniperus sibirica, произрастающего на территории Красноярского края. Откуда можно сделать вывод, что можжевельник сибирский - источник ценных веществ для медицины, парфюмерии, пищевой промышленности, а культура ткани - перспективное направление, позволяющее сохранить генофонд ценных древесных пород.
Список литературы
1. Воробьев Д.П. Дикорастущие деревья и кустарники Дальнего Востока. Л., 1987. 277 с.
2. Носов A.M. Лекарственные растения. М., 2001. 350 с.
3. Мухамедшин К.Д., Таланцев Н.К. Можжевеловые леса. М., 1982. 184 с.
4. Лагони Н. О можжевеловых ягодах // Аптечное дело. Томск, 2002. №5. С. 8-9.
5. Головкин Э.А., Кривенко В.В., Шулипенко А.И. Эффективность применения эфирных масел можжевельника обыкновенного при гнойничковых поражениях кожи // Республ. конф. по проблемам аллопатии: тез. докл. Киев, 1982.С. 170-171.
6. Александрова М.С. Хвойные растения в вашем саду. М., 2000. 224 с.
7. Кустова С.Д. Справочник по эфирным маслам. М., 1978. 175 с.
8. Уваровская Д.К. Эфирные масла дальневосточных видов рода Juniperus L.: содержание, состав, использование: дис. ... канд. биол. наук. Хабаровск, 2008. 155 с.
9. Томчук Р.И., Томчук Г.Н. Древесная зелень и ее использование в народном хозяйстве. М., 1973. 360 с.
10. Горяев М.И. Эфирные масла флоры СССР. Алма-Ата, 1952. С. 108-114.
11. Ермаков Б.С. Лесные растения в вашем саду. М., 1992. 160 с.
12. Адихотдаев К.Б., Баньковский А.И., Глызин В.И. Определение флавоноидов в растительном сырье // Фармация. 1977. №3. С. 3-27.
13. Мальчуковский Л.Б., Либизов Н.И. Определение тритерпеновых сапонинов в порошке и таблетках «сапарал» // Фармация. 1971. №2. С. 68-71.
14. Muranaka T., Miyata M., Ito K., Tachibana S. Production of podophyllotoxin in Juniperus chinensi's callus cultures treated with oligosaccharides and a biogenetic precursor // Phytochemistry. 1998. Vol. 49, N2. Pp. 491–496.
15. Кузнецова М.А. Лекарственное растительное сырье и препараты. М., 1987. 191 с.
16. Левин Э.Д., Миронов П.В. Современные физиолого-химические методы исследования: метод. указания к проведению лаб. работ для студентов спец. 2603 всех форм обучения. Красноярск, 1988. 28 с.
17. Девяткина В.А. Методы определения витаминов. М., 1954. 135 с.
18. Кейтс М. Техника липидологии. М., 1975. 322 с.
19. Псурцева Н.В., Белова Н.В., Алехина И.А. Биотехнология. М., 1978. 14 с.
20. Рязанова Т.В., Чупрова Н.А., Исаева Е.В. Химия древесины. Красноярск, 1996. 358 с.
21. Оболенская Л.В. идр. Практические работы по химии древесины и целлюлозы. М., 1965. 411 с.
22. Плынская Ж.А., Аёшина Е.Н., Величко Н.А. Культивирование хвойных в условиях in vitro // Хвойные бореальной зоны. 2008. Т. XXV, №1-2. С. 68-70.
23. Семенов А.А. Очерк химии природных соединений. Новосибирск, 2000. 664 с.
24. Головкин Б.Н., Руденская Р.Н., Трофимова И.А., Шретер А.И. Биологически активные вещества растительного происхождения: в 3-х т. М., 2001. Т. 2. 764 с.
25. Вардапертян Г.Р. и др. Накопление лигнинов в каллусных культурах Lignum austriacum L. под действием элиситоров //Биотехнология. 2002. №3. С. 37-41.
26. Савина Т.А., Цыбулько Н.С. Изучение возможности использования клеточной культуры подофила щитовидного в качестве источника биологически активных соединений // The Biology of Plant In Vitro and Biotechnology: abstracts VIII International Conference. Саратов, 2003. С. 88-89.
27. Anticancer extract // Chem. Eng. (USA). 2000. Vol. 107, N8. Pp. 17.
28. Носов A.M. Культура клеток высших растений - уникальная система, модель, инструмент // Физиология растений. 1999. Т. 46, №6. С. 837-844.
29. Болвелл Г.П. Биотехнология растений: культура клеток. М., 1989. 280 с.
Zyryanova J.V.*, Aeshina E.N., Velichko N.A. CHEMICAL COMPOUND OF A JUNIPERUS SIBIRICA B., CALLUS TISSUE AND POSTEXTRACTION THE REST
Siberian State University of Technology, Mira Street, 82, Krasnoyarsk (Russia)
The object of research had been chose a Juniperus sibirica, growing on territory of Krasnoyarsk region of Ermakovsky area. The purpose of the given work was studying of the qualitative and quantitative maintenance of biologically active substances and mineral structure of a Juniperus sibirica. In connection with uniqueness Juniperus sibirica B. and slow growth had been offered alternative technology of reception of biologically active substances by means of callus tissue.
The maintenance of biologically active substances was defined by the standard techniques used at the analysis of vegetative raw materials.
Research of mineral structure of needles was spent by atomno-adsorbtion plasma spectroscopy.
Identification of the separate components which are a part of essence, was spent with use of methods of a gas-liquid chromatography and hromato-massspektrometry.
Chemical compound research callus tissue and post-extraction rest Juniperus sibirica B. spent by the techniques accepted in chemistry of wood and biochemistry of plants.
As a result of the done work the maintenance of the most valuable biologically active substances in needles, callus tissue and post-extraction rest of Juniperus sibirica B. has been defined Krasnoyarsk region growing in territory. Whence it is possible to draw a conclusion that a Juniperus sibirica – a source of valuable substances for medicine, perfumery, the food-processing industry, and the culture of a fabric – the perspective direction, allowing to keep a genofund of valuable tree species.
Juniperus sibirica, a chemical compound, biologically active substances, essence, callus tissue, postextraction the rest.
References
1. Vorob'ev D.P. Dikorastushchie derev'ia i kustarniki Dal'nego Vostoka. [Wild trees and shrubs of the Far East]. Leningrad, 1987, 277 p. (in Russ.).
2. Nosov A.M. Lekarstvennye rasteniia. [Drug plants]. Moscow, 2001, 350 p. (in Russ.).
3. Mukhamedshin K.D., Talantsev N.K. Mozhzhevelovye lesa. [Juniper forests]. Moscow, 1982, 184 p. (in Russ.).
4. Lagoni N. Aptechnoe delo, Tomsk, 2002, no. 5, pp. 8–9. (in Russ.).
5. Golovkin E.A., Krivenko V.V., Shulipenko A.I. Respubl. konf. po problemam allopatii: tez. dokl. [Republican Conference on allopathy]. Kiev, 1982, pp. 170–171. (in Russ.).
6. Aleksandrova M.S. Khvoinye rasteniia v vashem sadu. [Conifers in Your Garden]. Moscow, 2000, 224 p. (in Russ.).
7. Kustova S.D. Spravochnik po efirnym maslam. [Handbook of essential oils]. Moscow, 1978, 175 p. (in Russ.).
8. Uvarovskaia D.K. Efirnye masla dal'nevostochnykh vidov roda Juniperus L.: soderzhanie, sostav, ispol'zovanie: dis. ... kand. biol. nauk. [Essential oils Far East species Juniperus L.: content, composition, the use of: thesis Ph.D. in Biology]. Khabarovsk, 2008, 155 p. (in Russ.).
9. Tomchuk R.I., Tomchuk G.N. Drevesnaia zelen' i ee ispol'zovanie v narodnom khoziaistve. [Green wood and its use in the national economy]. Moscow, 1973, 360 p. (in Russ.).
10. Goriaev M.I. Efirnye masla flory SSSR. [Essential oils of the USSR flora]. Alma-Ata, 1952, pp. 108–114. (in Russ.).
11. Ermakov B.S. Lesnye rasteniia v vashem sadu. [Forest plants in your garden]. Moscow, 1992, 160 p. (in Russ.).
12. Adikhotdaev K.B., Ban'kovskii A.I., Glyzin V.I. Farmatsiia, 1977, no. 3, pp. 3–27. (in Russ.).
13. Mal'chukovskii L.B., Libizov N.I. Farmatsiia,1971, no. 2, pp. 68–71. (in Russ.).
14. Muranaka T., Miyata M., Ito K., Tachibana S. Phytochemistry, 1998, vol. 49, no. 2, pp. 491–496. (in Russ.).
15. Kuznetsova M.A. Lekarstvennoe rastitel'noe syr'e i preparaty. [Herbal drugs and preparations]. Moscow, 1987, 191 p. (in Russ.).
16. Levin E.D., Mironov P.V. Sovremennye fiziologo-khimicheskie metody issledovaniia: metod. ukazaniia k provedeniiu lab. rabot. [Modern physiological-chemical methods of research: guidelines for the laboratory]. Krasnoiarsk, 1988, 28 p. (in Russ.).
17. Deviatkina V.A. Metody opredeleniia vitaminov. [Methods for determination of vitamin]. Moscow, 1954, 135 p. (in Russ.).
18. Keits M. Tekhnika lipidologii. [technique lipidology]. Moscow 1975, 322 p. (in Russ.).
19. Psurtseva N.V. Belova N.V., Alekhina I.A. Biotekhnologiia. [Biotechnology]. Moscow, 1978, 14 p. (in Russ.).
20. Riazanova T.V., Chuprova N.A., Isaeva E.V. Khimiia drevesiny. [Wood Chemistry]. Krasnoiarsk, 1996, 358 p. (in Russ.).
21. Obolenskaia L.V. et al. Prakticheskie raboty po khimii drevesiny i tselliulozy [Practical work on the chemistry wood and cellulose]. Moscow, 1965, 411 p. (in Russ.).
22. Plynskaia Zh.A., Aeshina E.N., Velichko N.A. Khvoinye boreal'noi zony, 2008, vol. XXV, no. 1-2, pp. 68–70. (in Russ.).
23. Semenov A.A. Ocherk khimii prirodnykh soedinenii. [Sketch of natural compounds]. Novosibirsk, 2000, 664 p. (in Russ.).
24. Golovkin B.N., Rudenskaia R.N., Trofimova I.A., Shreter A.I. Biologicheski aktivnye veshchestva rastitel'nogo proiskhozhdeniia. [Biologically active substances of plant origin]. Moscow, 2001, vol. 2, 764 p. (in Russ.).
25. Vardapertian G.R. et al. Biotekhnologiia, 2002, no. 3, pp. 37–41. (in Russ.).
26. Savina T.A., Tsybul'ko N.S. The Biology of Plant In Vitro and Biotechnology: abstracts VIII International Conference. Saratov, 2003, pp. 88–89. (in Russ.).
27. Chem. Eng., 2000, vol. 107, no. 8, pp. 17.
28. Nosov A.M. Fiziologiia rastenii, 1999, vol. 46, no. 6, pp. 837–844. (in Russ.).
29. Bolvell G.P. Biotekhnologiia rastenii: kul'tura kletok. [Biotechnology: cell culture]. Moscow, 1989, 280 p. (in Russ.).